石蠟切片
我們先來(lái)說(shuō)說(shuō)石蠟切片怎么做。組織包埋進(jìn)石蠟以后，做好的組織蠟塊常溫保存即可。但是如果你們實(shí)驗(yàn)室冰箱很空，放冰箱也可以。不過(guò)呢，蠟塊如果放冰箱倒真是有個(gè)很實(shí)用的功能，就是切出來(lái)的切片不容易裂（等下我們來(lái)討論原因），所以如果蠟塊事先一直是常溫保存的，在切片之前，最好也提前1-2h放入4℃預(yù)冷。預(yù)冷的這段時(shí)間，可以先做好準(zhǔn)備工作：
1、打開(kāi)漂片機(jī)，溫度調(diào)至40℃。做石蠟切片除了切片機(jī)以外還需要另一種儀器，那就是漂片機(jī)了。漂片機(jī)主要有兩個(gè)功能，一個(gè)是用溫水把切片鋪展、鋪平，便于貼到載玻片上，另一個(gè)就是把剛貼好切片的載玻片晾干。所以漂片機(jī)實(shí)際上就是個(gè)功能略復(fù)雜一些的水浴鍋，除了可以把水加熱，還可以盛放貼了切片的載玻片順便烘干切片；
2、由于切下來(lái)的薄層石蠟就像狗皮膏藥，非常容易黏在物體表面（你能想象的所有物體），并且黏上了就很難摳下來(lái)，所以事先要在切片機(jī)下面的臺(tái)面上鋪一層保鮮膜，這樣掉下來(lái)的石蠟都落在保鮮膜上，便于清理；
3、漂片的時(shí)候由于各種原因，會(huì)在水面上留下不少石蠟，這些石蠟也需要用保鮮膜黏走，所以在漂片機(jī)的水浴邊上也得搭上一片保鮮膜用于清理；
4、準(zhǔn)備好切片需要的工具，包括刀片（刀片是消耗品且比較貴）、眼科鑷（彎頭、直頭皆可）、毛筆（清掃用）、卷紙、防脫玻片、鉛筆。
漂片機(jī)
好了，等漂片機(jī)熱乎乎的，可以開(kāi)始切了。先把蠟塊從冰箱里拿出來(lái)，夾到切片機(jī)上。夾蠟塊的時(shí)候蠟塊擺放的方向可以有兩種選擇，或橫夾或豎夾，
1、刀片的長(zhǎng)度約10cm，切片過(guò)程中可能會(huì)卷刃（刀片卷刃會(huì)刮破標(biāo)本），但是卷也只是某一個(gè)點(diǎn)會(huì)卷，別的地方都是好的，這時(shí)候選擇豎夾有可能避開(kāi)卷刃處；
2、有的標(biāo)本比較狹長(zhǎng)，如果豎夾會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本通過(guò)刀片的時(shí)間比較長(zhǎng)（時(shí)間越長(zhǎng)，標(biāo)本被破壞的可能性越大），這時(shí)如果選擇橫夾可以較快地切出切片，盡可能保證標(biāo)本完好。
夾好蠟塊以后，挑一個(gè)用過(guò)很多次的、不是很新的、就算不那么鋒利也可以的刀片，先夾到刀片夾上，用來(lái)“修片”。這里給大家解釋一下為什么要“修片”。做好的石蠟塊表面不是光滑的，并且組織外表面是有相當(dāng)一部分石蠟遮擋的，所以一刀下去肯定是不能立刻切到組織的，就算一刀下去能切到組織，也不一定能切到你想要的部位或大小或形狀或……，總之，第一刀或前幾刀都不會(huì)讓你滿意，所以需要“預(yù)先”切幾刀，把表面那些不是你想要的東西切走，這就叫“修片”。那么有小伙伴要問(wèn)了，是不是以前切過(guò)的蠟塊再拿過(guò)來(lái)切就不需要修了呢？答案是：同樣需要。原因是以前切過(guò)的切面，放到現(xiàn)在你使用的這個(gè)切片機(jī)上，很可能不平行于刀片（肉眼很難看出來(lái)，一切就知道），也就導(dǎo)致蠟塊夾好以后，開(kāi)始切的前幾張切片不會(huì)是完整的，所以也要“修片”。修完片子，換上嶄新的刀片（就算不嶄新，用過(guò)一次兩次的也行，夠鋒利就可以），把切片厚度調(diào)到3μm），注意下一個(gè)動(dòng)作，用嘴對(duì)著石蠟塊哈一口氣，不哈一口氣的切片是沒(méi)有靈魂的。下面就搖動(dòng)手柄，讓切片飛起來(lái)。切的過(guò)程只有一個(gè)注意點(diǎn)，那就是“快”，切慢了就等著裂吧。切的過(guò)程中如果裂了，就哈氣，如果有劃痕就換個(gè)方向夾蠟塊或換刀片，請(qǐng)記得不管換什么，都要從修片開(kāi)始。
切片
切到不少滿意的片子就可以進(jìn)行“漂片”了。用眼科鑷挑選合適的切片鋪到水上，這時(shí)要耐心等待一個(gè)節(jié)點(diǎn)，就是組織周圍包裹的石蠟將化沒(méi)化之時(shí)（說(shuō)白了就是原本規(guī)則的正方形石蠟片變得有點(diǎn)不規(guī)則時(shí)），用載玻片從水下把切片撈上來(lái)，撈的時(shí)候切片也就貼在載玻片上了），載玻片記得提前用鉛筆在磨毛的部位標(biāo)記切片分組。貼好的載玻片放在晾干架上烘干，石蠟切片就完成啦，切下來(lái)的片子可以放在染色架上（就是個(gè)小吊籃），方便存取。
染色架
石蠟切片的做法講完了，下一講咱們繼續(xù)說(shuō)說(shuō)冰凍切片的做法。
做冰凍切片的組織，固定后需要脫水（啊奧）。一般采用的方法是蔗糖梯度脫水，從低濃度到高濃度依次脫水，做法也很簡(jiǎn)單，就是用蔗糖配成相應(yīng)濃度（一般是10%，20%，30%三個(gè)濃度）的溶液放到密封的容器里，然后把組織丟進(jìn)去泡著。泡完一個(gè)濃度的蔗糖泡下一個(gè)濃度，濃度遞增。詳細(xì)做法童鞋們百度看看。脫完水以后可以放-80℃保存很久很久很久。
1、關(guān)于卷刃，有些聰明的小伙伴可能要說(shuō)了，刀片有10cm，把卷刃的地方挪開(kāi)不就行了嗎？然而事實(shí)上是最好不要，不然很可能有血光之災(zāi)。因?yàn)橛行┑镀瑠A與刀片等長(zhǎng)，如果挪刀片，那就意味著有一節(jié)刀片是凸在外面的，刀片十分鋒利，很有可能切到人肉。事實(shí)證明，就算規(guī)規(guī)矩矩把刀片安裝在刀片夾上，也是有可能切到手的，因?yàn)榈镀浅嗦懵愕乇┞兜?。不過(guò)現(xiàn)在的切片機(jī)有些已經(jīng)注意到這個(gè)問(wèn)題，把刀片夾做的比刀片長(zhǎng)很多，不過(guò)大家還是小心為上，總不能為了切個(gè)片把命都搭上吧。
2、石蠟切片一般切3μm厚，如果有特殊要求，可以自行調(diào)整。正是因?yàn)榍衅挥?μm厚，所以如果童鞋們想要觀察多個(gè)不同部位的情況，請(qǐng)避免選擇連續(xù)的切片，因?yàn)檫B續(xù)的切片上你觀察到的結(jié)果沒(méi)有太大差別。當(dāng)然有些情況恰恰是需要觀察連續(xù)切片的，那就另當(dāng)別論了。現(xiàn)在就帶來(lái)了一個(gè)問(wèn)題，如果不連續(xù)選片，那應(yīng)該間隔幾張切片選擇呢？這個(gè)問(wèn)題的答案需要具體情況具體分析。舉個(gè)例子，如果你想觀察的是組織里某種細(xì)胞內(nèi)的情況，那么兩張切片之間的距離至少相差一個(gè)細(xì)胞的直徑，這樣你才能看到下一個(gè)細(xì)胞的情況。順便說(shuō)一下修片的厚度，由于修片目的只是獲得一個(gè)理想的平面，所以可以大刀闊斧，七八九十微米都沒(méi)什么問(wèn)題。
3、其實(shí)哈氣是避免組織裂開(kāi)，這跟前面提到的把組織放冰箱是一個(gè)目的。石蠟塊在處理的過(guò)程中經(jīng)固定、脫水，組織變得比較干脆（本俠想說(shuō)的是既干又脆），導(dǎo)致切片的時(shí)候很容易裂開(kāi)。如果這時(shí)候在上面蒙上一層水汽，情況會(huì)好很多。所以常溫保存的蠟塊要提前放冰箱預(yù)冷，切之前也要哈一口氣。
4、漂片的這個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)為什么要這么選呢？我們切下來(lái)的片子，中間是組織，周圍是石蠟，能牢牢黏在載玻片上的是石蠟而不是組織，即使是防脫玻片，對(duì)組織的吸附力也并不是很強(qiáng)，所以石蠟不僅僅能方便切片，同樣也有助于貼片。但是常溫的石蠟片作為固體，貼在載玻片上并不服帖，所以通過(guò)加熱的方法，讓石蠟稍稍融化，這樣就能讓切片緊緊地貼在載玻片上了。但是如果加熱時(shí)間太長(zhǎng)，石蠟融化過(guò)度，石蠟就散了，組織會(huì)與石蠟脫離，那石蠟也就失去存在的意義了。所以時(shí)間節(jié)點(diǎn)的把握很重要。